地球-65的蜘蛛女格溫（海莉·斯坦菲爾德配音）因好友彼特之死陷入愧疚，同時承受著父親對蜘蛛俠的誤解。一次行動中，她結識了來自其他宇宙的米圭爾·奧哈拉和杰西卡·德魯，得知多元宇宙瀕臨崩壞危機。為阻止災難，米圭爾召集各宇宙蜘蛛俠精英組成突擊隊，并邀請格溫加入。通過時空穿梭，格溫來到地球-1610與邁爾斯（沙梅克·摩爾配音）重逢。此時的邁爾斯正因與父母關系緊張而苦惱，他渴望加入突擊隊卻屢遭拒絕。隨著調查深入，邁爾斯發現所有蜘蛛俠的共同宿命——每個宇宙中他們終將失去至親。米圭爾為阻止多元宇宙崩塌而采取極端手段，迫使邁爾斯與格溫聯手對抗這位昔日英雄的偏執行為。